تحديد الحموض الأمينية (سيرين وغلايسين) بالتحليل الكروماتوغرافي السائل عالي الأداء المزود بكاشف الفلورة عن طريق تشكيل مشتقات ايزندولية

Authors

  • حسان صديق
  • رنا قازان

Abstract

درسنا العوامل المؤثرة في تفاعل الاشتقاق لسيرين (Ser) وغلايسين (Gly) بمزيج من كاشفي الاشتقاق أورتوفتال ألدهيد (OPA) و3 مركبتو بروبيونيك أسيد (3-MPA)لتشكيل مشتقات ايزندولية،حددنا الزمن اللازم والأمثل لتفاعل الاشتقاق وهو خمس دقائق،يتم التفاعل في وسط من واقي البورات (pH=10,0.4M)، بنسبة ارتباط 3-MPA:OPA توافق 1:3 ونسبة ارتباط OPA:Amino acid توافق 1:2،حددنا الزمن الأمثل لقياس المركب المشتق من 0.1-20 min.

وبعد دراسة كافة هذه العوامل قمنابتحديد المشتق الايزندولي للسيرين والمشتق الإيزندولي للغلايسين بالتحليل بالكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداءبالاعتماد على كاشف الفلورة من أجل التحديد الكمي لـــ Ser, Gly، باستخدام العمود  Agilent Zorbax Exclipe RP C18،وقياس الفلورة عندλEx= 340 nm)، (λEm= 450 nm.

حصلناعلى مجال قياس خطي µM- 250.5من أجل Ser، 1 - 25 µM من أجل Gly ، وحساسية ودقةعاليتين،ويتبين ذلك من القيمة المنخفضة للانحراف المعياري النسبي المئوي RSD% الذي لم يتجاوز قيمته لأصغر تركيز محدد( 3.25% بالنسبة لــ Serو3.07% بالنسبة لــ Gly) ، وبنتائج صحيحة ودقيقة من خلال المردود النسبي المئوي%(103.0-102.0) بالنسبة لــ Ser و %(95.8-94.0) بالنسبة لــ Gly.

بلغحد الكشف للسيرينnM36.82 وحد التحديد الكمي  nM111.59و حد الكشف للغلايسين 22.12 nM وحد التحديد الكمي  nM67.02.

We studied the Necessary Factors effecton Derivatization reaction forSerine and Glycine, The method involves the derivatization of Serine andGlycinewith a mixture of O-Phthaldialdehyde/3-Mercaptopropionic acid reagents to formisoindole derivative. The optimum time reaction was 5 min, in borate buffer (pH=10,0.4M), at molar ratio 3-MPA:OPA/1:3 and OPA:Amino acid/ 1:2, The optimum time for measurement was 0.1-20min.

After the Derivatization step we determine isoindole derivatives with High Performance Liquid Chromatographyutilizing afluorescence (FL) detector for reliable quantitative determination of (Ser and Gly).The chromatographic separation was achieved on a reversed-phase Agilent Zorbax Exclipe RP18 (C18). The FL detector was set at excitation wavelength(λEx) of 340 nm and emission wavelength (λEm) of 450 nm.

This method was validated with respect to linearity,0.5 – 25 µMfor Ser, and1 – 25 µMfor Gly, highly sensitivy, accuracy and  precision with RSD% was not more than3.25 %, 3.07% for Ser and Gly respectively.And recovery% was (102.0-103.0)% for Ser, (94.0-95.8)% for Gly.The calculated detection limit was very low (36.82, 22.12) nMfor Ser and Gly, and with very low LOQ (111.59, 67.02)nMfor Ser and Glyrespectively.

Author Biographies

حسان صديق

كلية العلوم- جامعة حلب- حلب- سورية.

رنا قازان

كلية العلوم- جامعة حلب- حلب- سورية.

Downloads

Published

2014-01-30

How to Cite

1.
صديق ح, قازان ر. تحديد الحموض الأمينية (سيرين وغلايسين) بالتحليل الكروماتوغرافي السائل عالي الأداء المزود بكاشف الفلورة عن طريق تشكيل مشتقات ايزندولية. TUJ-BA [Internet]. 2014Jan.30 [cited 2024May2];36(1). Available from: https://journal.tishreen.edu.sy/index.php/bassnc/article/view/712

Issue

Vol. 36 No. 1 (2014): العلوم الأساسية

Section

Articles

License

Creative Commons License

This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International License.

The authors retain the copyright and grant the right to publish in the magazine for the first time with the transfer of the commercial right to the Tishreen University Journal -Basic Sciences Series  

 Under a CC BY- NC-SA 04 license that allows others to share the work with of the work's authorship and initial publication in this journal. Authors can use a copy of their articles in their scientific activity, and on their scientific websites, provided that the place of publication is indicted in Tishreen University Journal -Basic Sciences Series .  The Readers have the right to send, print and subscribe to the initial version of the article, and the title of Tishreen University Journal -Basic Sciences Series   Publisher

 

journal uses a CC BY-NC-SA license which mean

You are free to:

  • Adapt — remix, transform, and build upon the material
  •  
  • The licensor cannot revoke these freedoms as long as you follow the license terms.

 

  • Attribution — You must give appropriate credit, provide a link to the license, and indicate if changes were made. You may do so in any reasonable manner, but not in any way that suggests the licensor endorses you or your use.
  • NonCommercial — You may not use the material for commercial purposes.
  • ShareAlike — If you remix, transform, or build upon the material, you must distribute your contributions under the same license as the original.
  • No additional restrictions — You may not apply legal terms or technological measures that legally restrict others from doing anything the license permits.